Уважаемый Доктор,

Высылаем вам результаты анализа пациента( имя больного), страдающего злокачественной опухолью груди на стадии IV. Образец, посланный на анализ, был образцом 25 мл всей крови, содержащей ЭДТК-Са как анти коагулянт, упакованный в воду со льдом. В нашей лаборатории мы выполняли следующее:

● Мы изолировали злокачественные клетки, используя Oncoquick с мембраной, изолирующей злокачественные клетки от нормальных клеток после центрифуги и положительного отбора, используя негативный отбор эпителиальным маркером клетки  с использованием частиц анти-CD45.

● Затем мы развиваем клеточные культуры в эмбрионной среде сыворотки телёнка и в то же время мы разводим колонию культур в мягком агаре. В каждую ячейку культуры мы добавляем химикотерапевтическую субстанцию, которая клинически применяется. Затем мы развивали эти культуры и получали образец каждые 24 часа в течении 6 дней и выполняли следующие исследования.

● Делали изолирование генома ДНК с использованием набора  Invisbor INVITEK.

● Мы изолировали mРНК с использованием набора изолирования крови Magprep NOVAGEN.

● Мы отслеживали mРНК и гены MDR1 ( большая сопротивляемость лекарству 1) , MRP и LRPс использованием метода Northern Blot ( сопротивляемость в лекарствах, используемых в химиотерапии).

● Мы отмечали маршрут mРНК и гена топоизомераза I и II a &b c использованием метода Northron Blot (чувствительность в цитостатических ингибиторах топоизомераза).

● Мы отмечали количество mРНК  тубулина с использованием RT-PCR( чувствительность в цитостатических таксанах и алкалоидных продуктах Винка).

● Мы определяли работу комплекса энзима глутатиона –S- перехода ( набор GST NOVAgen).

● Мы определяли ДНК метил трансфераза, который является мишенью алкилирующих факторов( продуктов платины, циклофосфамида и его продуктов).

● Мы определяли mРНК тимидалата синтетаза (TS) и DHFR ( чувствительностьв 5-FU, капицитабине и метотрексате).

● Мы определяли mРНК редактаза 5-СМР ( чувствительность в гемцитабине)

● Мы определяли рецепторы ММР и рецепторы ламина ( инвазивную (агрессивную)способность опухали).

● Мы определяли выражение протеина р27, который отвечает за арест клетки на стадии GO.

● Мы определяли VEGF (неоангенетический фактор) и стимулирование апоптотической дорожки с использованием набора ONCOGENE из NOVAgen.

● Мы определяли возможность действия ядерного протеина киназа, которые являются мишенью карбазиновых соединений.

● Мы определяли вытеснение факторов TGF и TGFb как мишеней для сульфата сурамина.

● Мы определяли вытеснение рецептора соматостатина (SS-R) COX-2 и 5-LOX, c-erb-B2(Her/Neu2), c-erb-BI и андрогенового эстрагена опухоли и в графиках есть развитие кривой для каждой категории цитостатика.

 

Гены	Функция гена	Результаты
CES1 &2 ( карбоксистераза)	Сопротивление камптотецину	нормальные
E2F1	Считывание генетического кода TS и структуры соединения	нормальные
pi 80	Рост тиразина киназа	50% контролируется
Р27	Арест клетки (GO)	45% на контролируеся
DPD	Cопротивление 5FU	нормальные
UP	Cопротивление 5FU	нормальные
NP	Сопротивление пирим антогонисту	нормальные
ТР	Сопротивление 5FU	нормальные
Гамма GC	Сопротивление алкилирующему лекарству	нормальное
р53	Регулятор цикла клетки	55% контролируется
pl6	Апоптоз(утрата клеток)	40% контролируется
VEGF	Ангиогенез(регенерация тканей)	60% контролируется
FGF	Ангиогенез	50% контролируется
PDGF	Ангиогенез	45% контролируется
СОХ2	Рост опухоли	нормальные
5-LOX	Рост опухоли	нормальные
ММР	Метастазы	55% контролируется
TS	Быстрый цикл клетки (THFA)	нормальные
DHFR	Быстрый цикл клетки (THFA)	нормальные
SHMT	Быстрый цикл клетки (THFA)	нормальные
GARF	Быстрый цикл клетки (THFA)	нормальные
NFkB	Cчитывание генетического кода	35% контролируется
IkB (a, d, e)	Ингибитор NFkB	40% не контролируется
Редуктаза рибонуклеосида	Синтез ДНК	нормальные
ДНК Метилтрансфераза I	Метилирование ДНК	40% контролируется
ДНК демитилаз	Метилирование ДНК	25% не контролируется
06-метилгуанини-ДНК-тран	Метилирование ДНК	нормальные
TGF-b	Рост опухоли	40% контролируется
EGF	Рост опухоли	50% контролируется
IGF	Рост опухоли	нормальные
CypBI	Ксенобиотический метаболизм	нормальные
Хистон дицилаз-диспептид	Наматывание ДНК (нуклеосомы)	нормальные
c-erb-B2	Her/neu2	50% контролируется
c-erb-BI	Herl	50% контролируеся
Bcr-abl	Сопротиление фенотипу	Нормальные
h-TERT (человеческий теломераз)	Кризисно-агрессивный фенотип М2	20% контролируется

Из выше приведенного исследования мы делали следующие выводы:

1. Из всей неоплазмической популяции мы имеем выражение MDRI в процентном отношении 50% в контрольном образце( положительно на проверку сопротивляемости).
2. Из всей неоплазмической популяции мы имеем выражение MDRI в процентном отношении 50% в контрольном образце( положительно на проверку сопротивляемости).
3. Активность гамма GC стабильна в низких пределах  ( нет сопротивляемости платиновым веществам).
4. Активность CES1 и CES2 находится в нормальном диапазоне ( нет сопротивляемости комптотециновым веществам).
5. Концентрация р80 находится в высоком диапазоне.
6. Увеличенная активность ламинина  и ММР ( увеличенная инвазивная способность).
7. Наблюдается частичная чувствительность в таксанах ( паклитаксел, доцетаксел) и частичная чувствительность в алколоидах Винка.
8. Минимальная чувствительность наблюдалась в 5FC, 5-FU, FUdR, в капецитабине, ралтитрексиде, метотрексате, пеметрексе и большая чувствительность в гемцитабине.
9. Увеличенная чувствительность в алкилирующих факторах (особенно в циклофосфамиде и мелфалане).
10. Вольшое вытеснение наблюдается TGF b ( 40% контроля), NFkBete (35%контроля) и EGF-r (50%, ≤ 70%) факторы роста и подавления вытеснения изоформ IKB (a,d,e) ( контроль ниже 40%).
11. Выяснилось отсутствие чувствительности в ингибиторах топоизомеразы IIa  и IIb.
12. Наблюдается большая активность в ингибиторе топоизомеразы I(особенно в топотекане).
13. Нет вытеснения рецептора SS-r и нет вытеснения COX-2 mРНК, 5-LOX mРНК и есть большое вытеснение с-erb-B2 (50% контроля),c-erb-BI( 55% контроля) , рецептор эстрогена mРНК (45% контроля) и рецептора прогестерона mРНК (10% контроля).
14. Мы замечаем большую способность неоангиогенезу ( выдавливание VEGF-R -60% контроля образца).
15. И на конец нет чувствительности в дикарбазине.
16. Мы замечаем , что тауролидин не может вызывать апоптоза в злокачественных клетках ( в IV маршруте дозировки).
17. Мы замечаем , что тауролидин не может вызывать апоптоза в злокачественных клетках ( во внутрибрюшном маршруте дозировки).

ВЫВОД:

● Особая опухоль выявляет наличие сопротивляющихся популяций из-за вытеснения MDR1, что можно направить в обратную сторону использованием верапамила, комбинированного с соединениями имидазола (кетоканазола).

● Неоплазматические клетки имеют более высокую чувствительность в алкилирующих агентах сvклофосфамида и мельфалана,  в ингибиторе опоизомераза топотекан I и в антогонисте немцитабине.

Талидомид

Уважаемый доктор,

Высылаем вам результаты анализа пациента( имя больного), страдающего злокачественной опухолью груди на стадии IV. Образец, посланный на анализ, был образцом 25 мл всей крови, содержащей ЭДТК-Са как анти коагулянт, упакованный в воду со льдом. В нашей лаборатории мы выполняли следующее.

● Мы изолировали злокачественные клетки, используя Oncoquick с мембраной, изолирующей злокачественные клетки от нормальных клеток после центрифуги и положительного отбора, используя негативный отбор эпителиальным маркером клетки  с использованием частиц анти-CD45.

● Мы развиваем (2) две разных культуры  из злокачественных клеток ( одну с толидомидом [th+] в культурной среде – в концентрации AUC- и одну без талидомида [th-] из образца крови пациента.

● Из культуры, включающей талидомид [th+] в культуру среды со злокачественными клетками мы измеряем работу каспаза 3 и цитохрома с.

● В обеих культурах мы выполняем сравнительный анализ ингибиторного диапазона (уровня) VEGF, PDGF и ММР.

Результаты представлены ниже: 

      Сравнительный анализ культур злокачественных клеток

Биологические Модификаторы ( Холистические альтернатиные субстанции)

Уважаемый Доктор,

Высылаем вам результаты анализа пациента( имя больного), страдающего злокачественной опухолью груди на стадии IV. Образец, посланный на анализ, был образцом 25 мл всей крови, содержащей ЭДТК-Са как анти коагулянт, упакованный в воду со льдом. В нашей лаборатории мы выполняли следующее:

● Мы изолировали злокачественные клетки, используя Oncoquick с мембраной, изолирующей злокачественные клетки от нормальных клеток. Затем пропускали через центрифугу 350 г в течение 10 минут и собирали надосадочную жидкость (супернанат). Потом мы продолжаем негативным отбором изолировать злокачественные клетки  от одноядерных клеток. 

● Затем мы развивали 41 клеточную культуру в эмбрионной среде сыворотки телёнка В каждую ячейку мы добавляли субстанцию биологического модификатора (Н2О2, аскорбиновую кислоту, карнивору, омелу, кверцитин, индол 3-карбинол, с-статин, украин, полиMVA, со энзим Q10, эссиаковый чай, модифицированный цитрусовый пиктин , IP6, пакреатитовые энзимы, сальвестрол, Ункария Томентоза, , карктол, нони сок, ананосеоз ацетогенина, хлорид цезия, реолизин, амигдалин –В-17, артесунат, маитак, лицопен, куркумин, экстракт зелёного чая, мелатонин, эллаговая кислота, L-метеонин, N-ацетил-цистин, Ниацин (Витамин В3), L-карнитин, витамин Е, супер оксид дисмутаза (SOD), селен, алоэ древовидное, IFNa2, Клим основной чай, Клим чай drc, тап-V) , который клинически используется. Потом мы развивали эти культуры и получали образец каждые 24 часа и выполняли следующие исследования.

● В культуре, содержащей все субстанции, мы измеряем апоптотическую способность с использованием онкогенного набора опоптоза.

● В культуре, содержащей карнивора(плотоядную субстанцию), мы измеряем подавление каталитической способности тирозин киназа от  рецепторных факторов роста (EGF-r, IGF-r) и производство цитокиназа.

● В культуре, содержащей украин, мы измеряем подавление каталитической способности тирозин киназа от рецепторных факторов роста (EGF-r, IGF-r) и производство цитокиназа РМВС.

● В культуре, содержащей кверцитин, мы измеряем подавление  EGFи IGF.

● В культуре, содержащей индол-3-карбинол мы измеряем подавление VEGF и FGF и PDGF.

● В культуре, содержащей омелу белую, мы измеряем подавление каталитической способности тирозин киназаот рецепторных факторов роста рецепторных факторов роста (EGF-r, IGF-r) и производство цитокина и увеличение РМВС.

● В культуре, содержащей Н2О2, мы измеряли жизнеспособность культуры через 4 дня лечения.

● В культуре, содержащей аскорбиновую кислоту, мы измеряем каталитическую деятельность GSH и GSSG ( окислительно-восстановительная реакция) и стимулирование цитохрома С ( апоптоза).

● В культуре, содержащей PolyMVA, мы измеряем каталитическую деятельность GSH и GSSG (окислительно-восстановительная реакция) и стимулирование цитохрома С (апоптоза).

● В культуре, содержащей артезунат, мы измеряем каталитическую деятельность GSH и GSSG ( окислительно-восстановительную реакцию для свободных радикалов так как артезунат связывает свободные радикалы с молекулой железа), угнетению VEGF, FGF и PDGF ( так как он действует каскадной реакцией ангиогенеза) и производством цитохрома С (апоптоза).

● В культуре, содержащей артезунат, мы измеряем каталитическую деятельность GSH и GSSG (окислительно-восстановительную реакцию для свободных радикалов так как артезунат связывает свободные радикалы с молекулой железа), угнетению VEGF, FGF и PDGF ( так как он действует каскадной реакцией ангиогенеза).

РЕЗУЛЬТАТЫ:

1. Мы замечаем, что культура, содержащая аскорбиновую кислоту,  мы имеем увеличение каскада каспаза ( особенно 3 и 9) и цитохрома-с на 50%.
2. Мы замечаем, что в культуре, содержащей polyMVA, наблюдается увеличения каскада каспаза (особенно 3 и9) и цитохром-с на 45%.
3. Мы замечаем, что в культуре, содержащей карнивора мы имеем  угнетение EGF-r и IGF-r на 5% и мы не наблюдаем увеличение производства цитокина на 5%. .
4. Мы замечаем, что в культуре, содержащей кверцитин, мы имеем угнетение EGF yf 55% и IGF на 50%.
5. Мы замечаем, что в культуре, содержащей индол-3-карбинол, мы имеем угнетение VEGF на 60% и FGF на 60% и PDGF на 55%.
6. Мы замечаем, что в культуре, содержащей амелу (mistletoe), мы имеем угнетение EGF-r на 50% и IGF-r на 45% и мы наблюдаем увеличение производства цитокина на 70% и увеличение РМВС на 70%.
7. Мы замечаем, что в культуре, содержащей с-статин, наблюдается увеличения каскада каспаза (особенно 3 и9) и цитохром-с на 50%.
8. Мы замечаем, что в культуре, содержащей украин, мы имеем угнетение EGF-r менее чем на 5%и IGF-r  на 5% и мы не отмечаем увеличение производства цитокина и нет увеличения РМВС.
9. Мы замечаем, что в культуре, содержащей Н2О2, наблюдается увеличения каскада каспаза (особенно 3 и9) и цитохром-с  менее чем на 5% и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
10. Мы замечаем, что в культуре, содержащей ко энзим Q1, наблюдается увеличения каскада каспаза (особенно 3 и9) и цитохром-с  менее чем на 5% и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
11. Мы замечаем, что в культуре, содержащей ессиаковый чай, наблюдается увеличения каскада каспаза (особенно 3 и9) и цитохром-с  менее чем на 5% и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
12. Мы замечаем, что в культуре, содержащей модифицированный цитрусовый пиктин, наблюдается увеличения каскада каспаза (особенно 3 и9) и цитохром-с  менее чем на 5% и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
13. Мы замечаем, что в культуре, содержащей IP6, наблюдается увеличения каскада каспаза (особенно 3 и9) и цитохром-с  менее чем на 5% и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
14. Мы замечаем, что в культуре, содержащей пакреатические энзимы, мы имеем каскад каспаза ( особенно 3 и9) и цитохром –с менее чем на 5% и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
15. Мы замечаем, что в культуре, содержащей сальвестрол, мы имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с менее чем на 5% и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
16. Мы замечаем, что в культуре, содержащей ункариа томентоза, мы имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с менее чем на 5% и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
17. Мы замечаем, что в культуре, содержащей хлорид цезия, мы не имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с менее чем на 5% и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
18. Мы замечаем, что в культуре, содержащей карактол, мы имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с менее чем на 5% и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
19. Мы замечаем, что в культуре, содержащей нони сок, мы имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с менее чем на 5% и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
20. Мы замечаем, что в культуре, содержащей анонацеоз ацетогенина, мы имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с менее чем на 5% и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
21. Мы замечаем, что в культуре, содержащей реолизин, мы имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с менее чем на 5% и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
22. Мы замечаем, что в культуре, содержащей амигдалин-В 17-, мы не имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с менее чем на 5% и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
23. Мы замечаем, что в культуре, содержащей маитак, мы имеем подавление EGR-r менее чем на 5%  и IFR-r на 5% и мы замечаем , что нет увеличения продукции цитокина и нет увеличения РМВС.
24. Мы замечаем, что в культуре, содержащей куркумин (турмерик), мы не имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с менее чем на 5% и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
25. Мы замечаем, что в культуре, содержащей ликопин, мы не имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с менее чем на 5% и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
26. Мы замечаем, что в культуре, содержащей экстракт зелёного чая, мы не имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с менее чем на 5% и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
27. Мы замечаем, что в культуре, содержащей артесунат, мы имеем угнетение окислительно-восстановительной реакции и межклеточных свободных радикалов и имеется увеличение цитохрома-с (апоптоза) на 65% и степень угнетения VEGF составляет 55%, FGF-50%, PDGF-45%. 
28. Мы замечаем, что в культуре, содержащей мелатонин, мы не  имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с  и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
29. Мы замечаем, что в культуре, содержащей эллагиевую кислоту, мы имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с более чем на 60% и жизнеспособность культуры снижается на 40%.
30. Мы замечаем, что в культуре, содержащей L-метионин, мы не имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
31. Мы замечаем, что в культуре, содержащей N-ацетил-цистин, мы не имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
32. Мы замечаем, что в культуре, содержащей неоцин, мы не имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
33. Мы замечаем, что в культуре, содержащей L-эмитин , мы не имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с  и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
34. Мы замечаем, что в культуре, содержащей витамин-Е, мы не имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
35. Мы замечаем, что в культуре, содержащей супероксид дисмутаза, мы не имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
36. Мы замечаем, что в культуре, содержащей экстракт алоэ древовидное, мы не имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
37. Мы замечаем, что в культуре, содержащей селен, мы имеем подавление EGR-r менее чем на 5% и IGF-r на 5%  и мы не наблюдаем увеличения производства цитокина и нет увеличения РВМС и NK.
38. Мы замечаем, что в культуре, содержащей IFNA2, мы имеем угнетение EGF-r менее чем на 5% и IGF-r на 5% и мы не замечаем увеличения производства цитокина и нет увеличения РМВС.
39. Мы замечаем, что в культуре, содержащей tap-V, мы имеем угнетение EGF-r на 25% и IGF-r на 20% и мы замечаем увеличение производства цитокина на 95% и увеличение РМВС на 80%.
40. Мы замечаем, что в культуре, содержащей Клим базовый чай, мы не имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.
41. Мы замечаем, что в культуре, содержащей клим  чай drc, мы не имеем увеличение каскада каспаза (особенно 3 и 9) и цитохрома-с и жизнеспособность культуры остаётся стабильной.

ВЫВОД: Кажется, что особая популяция злокачественной клетки имеет большую чувствительность в кверцитине, артезунате, Poly-MVA,  индоле-3-карбиноле, мислетое, с-статине, эллагиевой кислоте, tap-V, аскорбиновой кислоте, и меньшую в Н2О2, ко энзиме Q 10, эссиаковом чае, модифицированном цитрусовом пиктине, IP6, N-ацетил-цистине, пакреатывных энзимах, салвестроле, карниворе, L-карнитине, L-метионине, витамине Е(токофероле), маитаке, украине, хлориде цезия, IFNa2., супероксиде дисмутаза, амигдалине –(В17), куркумине (турмерик), ункария томентоза (саменто), мелатонине, селене, карктоле, нони соке, ниацине, алоэ древовидное, анонасеозе, ацетогение (paw paw), реолизине (реовирус),  ликопине,  клим базовом чае, клим базовом чае drc и экстракте зелёного чая.